深芬儀器CSY-E96D非洲豬瘟檢測方法非洲豬瘟快速檢測儀

• 實驗所需自備試驗器材*
• 檢測儀（450nm）
• 高精度加樣器及槍頭：10-200ul    1000-5000ul
• 37℃恒溫箱或水浴鍋
• 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成：

非洲豬瘟快速檢測儀試劑準備

1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

• 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象；放置室溫，輕搖均勻，待結晶*溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃
• 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

非洲豬瘟快速檢測儀試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被非洲豬瘟抗體的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標本中非洲豬瘟（ASF）的存在與否。

非洲豬瘟快速檢測儀前處理方法

1：血清：使用不含熱源和內素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞小心地分離

方法2：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉或甘素抗凝，離心30分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

5. 組織標本：將組織加入適量生理鹽搗碎，3000轉離心10分鐘取上清液

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

非洲豬瘟快速檢測儀CSY-E96D非洲豬瘟檢測方法czcz作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；

3.  待測樣本孔加待測樣本10μL，在加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

李丹q 2072559023**3122752409